1.重要的洗滌：

　　如果洗滌不充分，會造成一系列的差異和高背景zui后導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差大。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。條件允許的情況下，適當(dāng)增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

　　2.關(guān)鍵的封閉：

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。如果背景過高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長封閉時間。

　　目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。

　　3.抗體濃度須優(yōu)化：

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。

　　第四、檢測試劑要適量：

　　一定不可以使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。